เนื้อหา
Lise เป็นคำภาษากรีกและหมายถึง "การแบ่ง" หรือ "สลายตัว" เป็นคำอธิบายที่ดีเกี่ยวกับปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นกับเซลล์ในบัฟเฟอร์ lysis ซึ่งเป็นวิธีการแก้ปัญหาที่แยกพวกมันออกเพื่อดึงเนื้อหาออกมา นักวิทยาศาสตร์ใช้วิธีการแก้ปัญหาเหล่านี้เพื่อแยกดีเอ็นเอหรือโปรตีนในการวิเคราะห์เซลล์โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของแบคทีเรีย ประเภทของบัฟเฟอร์การสลายเซลล์แตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับประเภทของการทดลองอย่างไรก็ตามเราจะพูดถึงตัวเลือกทั่วไปบางประการ
บัฟเฟอร์และเกลือ
สารละลายบัฟเฟอร์จะทำให้ pH คงที่ในขณะที่เซลล์ผ่านกระบวนการแตกตัว สารละลาย tris-HCL เป็นบัฟเฟอร์ที่พบบ่อยที่สุดสำหรับการบัฟเฟอร์ที่ pH 8 หากต้องการ pH HEPES เป็นอีกหนึ่งวิธีแก้บัฟเฟอร์ทั่วไปในการทดลองเหล่านี้ นอกจากนี้ยังสามารถเพิ่มโซเดียมคลอไรด์เพื่อเพิ่มความแข็งแรงของไอออนิกความเข้มข้นทั้งหมดของตัวถูกละลายนอกเซลล์ สิ่งหลังมีความสำคัญเนื่องจากน้ำสามารถแพร่กระจายไปยังเยื่อหุ้มเซลล์ทั้งหมดตั้งแต่บริเวณที่มีความเข้มข้นของตัวถูกละลายต่ำไปจนถึงผู้ที่มีความเข้มข้นสูง
ผงซักฟอก
ผงซักฟอกเป็นส่วนประกอบหลักที่ละลายเยื่อหุ้มเซลล์เพื่อให้สารต่างๆหลุดออกไป ผงซักฟอกเป็นโมเลกุลแอมฟิพาทิกกล่าวคือปลายด้านหนึ่งทำปฏิกิริยากับโมเลกุลของน้ำได้ง่ายในขณะที่ปลายอีกด้านที่ไม่ชอบน้ำหรือ "ที่กลัวน้ำ" จะไม่ทำปฏิกิริยานั้น พวกมันสามารถละลายไขมันได้โดยการสร้างไมเซลส์ซึ่งเป็นกลุ่มเล็ก ๆ ซึ่งหางที่ไม่ชอบน้ำของโมเลกุลของผงซักฟอกจะชี้เข้าด้านในของโมเลกุลของไขมัน ผงซักฟอกทั่วไป ได้แก่ โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตหรือ SDS, NP-40 และ tritonX
สารคีเลตและสารยับยั้ง
โดยปกติแล้วบัฟเฟอร์ Lysis จะมีสารคีเลตเช่น ethylene diaminetetraacetic acid (EDTA) หรือ retylene glycol tetraacetic acid (EGTA) สารเคมีเหล่านี้จับกับไอออนของโลหะโดยมีประจุ +2 (เช่นแมกนีเซียมและแคลเซียม) จึงทำให้ไม่สามารถใช้สำหรับปฏิกิริยาอื่น ๆ ได้ DNAs จำนวนมาก (โปรตีนที่เคี้ยว DNA) และโปรตีเอส (โปรตีนที่ตัดโปรตีนอื่น ๆ ) ต้องการไอออนของแมกนีเซียมในการทำงานดังนั้นการปราศจากส่วนผสมหลัก EDTA และ EGTA นี้จะช่วยลดระดับของโปรตีเอสหรือ ของกิจกรรม DNAse อย่างไรก็ตามพวกมันไม่ได้แยกออกอย่างสมบูรณ์และโปรตีเอสบางชนิดไม่ได้ขึ้นอยู่กับปัจจัยร่วมของแมกนีเซียมดังนั้นบางครั้งบัฟเฟอร์การสลายจะมีสารที่เรียกว่าสารยับยั้งโปรตีเอสซึ่งจับกับมันและป้องกันไม่ให้มันทำงานอย่างถูกต้อง
อัลคาไลน์ลิซิส
การสลายอัลคาไลน์เป็นเทคนิคที่ใช้กันทั่วไปในการทำให้พลาสมิดจากแบคทีเรียบริสุทธิ์ วิธีนี้หมายถึงการใช้สามวิธี ครั้งแรกประกอบด้วยกลูโคสบัฟเฟอร์ tris-HCL EDTA และ RNAses กลูโคสสร้างแบคทีเรียภายนอกตัวถูกละลายที่มีความเข้มข้นสูงจนหย่อนยานเล็กน้อยซึ่งอำนวยความสะดวกในกระบวนการสลาย EDTA และ tris-HCL ทำงานตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ในขณะที่ RNAse จะเคี้ยว RNA ใด ๆ ภายในเซลล์เพื่อกำจัดออกไป วิธีที่สองทำให้เซลล์แตกได้อย่างมีประสิทธิภาพ ประกอบด้วยผงซักฟอก SDS และ NaOH ซึ่งจะเพิ่ม pH เป็น 12 หรือสูงกว่าทำให้โปรตีนภายในเซลล์เสื่อมสภาพและทำให้ DNA แยกออกเป็นเส้นใยอย่างง่าย สารละลายที่สามประกอบด้วยโพแทสเซียมอะซิเตทเพื่อคืนค่า pH ให้อยู่ในระดับที่เป็นกลางมากขึ้นเพื่อให้สายดีเอ็นเอของพลาสมิดมารวมกันได้ ในขณะเดียวกันโปรตีนที่แตกตัวจะรวมตัวกันและตกตะกอนในขณะที่ไอออนของ dodecyl sulfate จะเข้าร่วมกับโพแทสเซียมไอออนเพื่อสร้างสารประกอบที่ไม่ละลายน้ำซึ่งสามารถตกตะกอนออกจากสารละลายได้