คำอธิบายคราบกรัมของวัณโรค

เนื้อหา

• สรีรวิทยา
• คราบแกรม
• คราบอั้มมารีน - โรดามีน
• การระบายสี Ziehl-Neelson
• วุ้น

วัณโรคเป็นโรคติดเชื้อที่เกิดจากเชื้อแบคทีเรีย Mycobacterium tuberculosis และเป็นโรคทางเดินหายใจที่มีลักษณะของการก่อตัวของท่อเนื้อร้ายฝีพังผืดและการกลายเป็นปูนในปอด นอกจากนี้ยังสามารถติดเชื้อที่ไตต่อมน้ำเหลืองกระดูกข้อต่อและผิวหนัง

การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการเบื้องต้นของบาซิลลัสนี้เกี่ยวข้องกับการย้อมสีเพื่อให้เห็นภาพแบคทีเรียภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ตัวอย่างที่เลือกคือการล้างเสมหะหรือหลอดลมเพื่อระบุการติดเชื้อทางเดินหายใจหรือตัวอย่างเนื้อเยื่อที่แท้จริง

สรีรวิทยา

Mycobacterium tuberculosis เป็นสิ่งมีชีวิตที่มีรูปร่างคล้ายแท่ง (bacilli) สปอร์ที่ไม่เคลื่อนที่และไม่บังคับ แบคทีเรียชนิดนี้มีความยาว 0.4x3 ไมโครเมตรและผ่านการฟิชชันแบบไบนารี (การแบ่งเซลล์สืบพันธุ์) ทุกๆ 15 ถึง 24 ชั่วโมงซึ่งถือว่าช้าเมื่อเทียบกับแบคทีเรียอื่น ๆ ด้วยเหตุนี้ไมโคแบคทีเรียจึงอาจใช้เวลาถึงเก้าสัปดาห์จึงจะปรากฏในอาหารเลี้ยงเชื้อ

สิ่งมีชีวิตนี้มีความไวต่อแสง UV และความร้อน (เช่นการพาสเจอร์ไรส์) แต่ต่อต้านสารเคมีฆ่าเชื้อ

คราบแกรม

Mycobacterium tuberculosis ไม่สามารถจำแนกได้อย่างแท้จริงว่าเป็นแกรมบวกหรือแกรมลบ การจำแนกประเภทนี้จัดทำขึ้นโดยพิจารณาจากปริมาณของเปปทิโดไกลแคนในผนังเซลล์ของแบคทีเรีย สายพันธุ์แกรมบวกมีชั้นโมเลกุลนี้หนา (ประมาณ 90%) ในขณะที่สายพันธุ์แกรมลบมีชั้นบาง ๆ (จาก 5% ถึง 20%) คราบแกรมแทรกซึมผนังเซลล์และจับกับส่วนประกอบทางเคมีที่อยู่ในนั้น ภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบคทีเรียที่เปื้อนจะเปลี่ยนเป็นสีม่วงหรือชมพู

ด้วยไมโคแบคทีเรียมทูเบอร์คูโลซิสผนังเซลล์ประกอบด้วยเพปทิโดไกลแคน แต่ยังมีไขมันเชิงซ้อนที่ยับยั้งการซึมผ่านของสีย้อมกรัม ผนังเซลล์ยังต้านทานการเปลี่ยนสีจากกรดหรือแอลกอฮอล์ซึ่งเป็นสาเหตุที่ไมโคแบคทีเรียมเรียกว่า "ทนกรด" ไขมันที่ผนังเซลล์ ได้แก่ กรดไมโคลิกปัจจัยสตริงและดีแว็กซ์ หากต้องย้อมเชื้อแบคทีเรียเซลล์จะมีลักษณะเป็นแกรมบวกหรือซีดเล็กน้อยและมีสีน้อยมาก

หากต้องการดูแบคทีเรียต้องใช้คราบพิเศษเช่นคราบ Aumarine หรือ Zhiel-Neelson

คราบอั้มมารีน - โรดามีน

กระบวนการโดยใช้ auramine-rhodamine ใช้สีย้อมเรืองแสงสีเหลืองเพื่อให้เห็นภาพเชื้อวัณโรคจากเชื้อมัยโคแบคทีเรียภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง โพแทสเซียมเปอร์แมงกาเนตหรือส้มอะคริดีนสามารถใช้เป็นสีย้อมที่ตัดกันได้ ภายใต้เลนส์เซลล์แบคทีเรียจะปรากฏเป็นสีเขียว

สีย้อม auramine-rhodamine มีความไวมากกว่า Zhiel-Neelson และมีประสิทธิภาพทางเศรษฐกิจมากกว่า

การระบายสี Ziehl-Neelson

คราบ Ziehl-Neelson ถูกสร้างขึ้นโดยนักวิทยาศาสตร์ Franz Ziehl และ Friedrich Neelsen และใช้คาร์โบล - ฟุคซินที่ให้ความร้อนกรด - แอลกอฮอล์ที่มีความเข้มข้นสูงและสีย้อมที่ตัดกันเช่นมาลาไคต์สีเขียวหรือเมทิลีนบลู ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงเซลล์แบคทีเรียจะปรากฏเป็นสีชมพูสดใส

สีย้อม Ziehl-Neelson เป็นมาตรฐานความเป็นเลิศสำหรับการระบุเบื้องต้นของเชื้อวัณโรคและมัยโคแบคทีเรียมเลแพร

วุ้น

รองจากการระบุด้วยกล้องจุลทรรศน์ต้องปลูก mycobacterium tuberculosis โดยใช้วุ้นพิเศษ เจลาติน Lowenstein-Jensen มีสารอินทรีย์ที่ซับซ้อน (เช่นไข่และมันฝรั่ง) เกลือกลีเซอรอลและมาลาไคต์กรีน (ซึ่งยับยั้งแบคทีเรียอื่น ๆ ) สามารถเพิ่มยาปฏิชีวนะเพื่อยับยั้งเชื้อจุลินทรีย์ที่ปนเปื้อนได้ ตัวอย่างจะถูกวางลงบนวุ้นนี้และแบคทีเรียจะเติบโตในสามถึงเก้าสัปดาห์

สารละลายเพาะเลี้ยงสารอาหารเช่นอัลบูมินและไบโอตินสามารถใช้เพื่อสนับสนุนการเจริญเติบโตของแบคทีเรียเป้าหมายในปริมาณที่น้อยที่สุด สิ่งนี้เรียกว่า Middlebrook 7H9 (หรือ 7H12)

ในสื่อทั้งสองโคโลนีจะปรากฏเป็นโคโลนีขนาดเล็กขัดเงาสีน้ำตาลอ่อน

ด้วยเทคโนโลยีขั้นสูงปัจจุบันเชื้อวัณโรคสามารถเติบโตได้โดยใช้เครื่องอ่านอัตโนมัติ สารละลายของเหลวของตัวกลาง Middlebrook 7H9 และสารประกอบตัวบ่งชี้เรืองแสงใช้เพื่อตรวจสอบการเจริญเติบโตและรายงานการติดเชื้อในเชิงบวกหรือเชิงลบ