เนื้อหา
สารประกอบทางเคมี cetyltrimethylammonium bromide, hexadecyltrimethylammonium bromide, palmityltrimethylammonium bromide และ cetrimonium bromide ล้วนเป็นที่รู้จักกันดีเช่นกันโดย CTAB สารเคมีถูกใช้เป็นตัวดูแลค่า pH ในจีโนมลำดับดีเอ็นเอโดยเฉพาะพืช
การกัดผนังเซลล์ของพืชเพื่อสกัดดีเอ็นเอ (Jason Reed / Ryan McVay / Digital Vision / Getty Images)
สูตร CTAB
ปริมาณของสูตรของสารเคมี CTAB ต่างๆนั้นแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับห้องปฏิบัติการ อย่างไรก็ตามส่วนผสมทั้งหมดรวม 1 M Tris HCl pH 8.0, 0.5 M EDTA, 5 M NaCl และ H2O (บางครั้งกลั่นสองครั้ง) สำหรับองค์ประกอบ CTAB ห้องปฏิบัติการบางแห่งใช้ cetyltrimethylammonium bromide และ hexadecyltrimethylammonium bromide
การเตรียมเนื้อเยื่อผัก
การเตรียมเนื้อเยื่อพืชอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับวัสดุ ผนังและเยื่อหุ้มเซลล์จะต้องถูกทำลายเพื่อให้สามารถเข้าถึงวัสดุนิวเคลียร์ได้โดยไม่เสื่อมโทรม โดยปกติในการกัดวัสดุของพืชที่มีไนโตรเจนเหลวจะช่วยให้สามารถเข้าถึง DNA ได้ทำให้มีเอนไซม์ที่เป็นอันตรายต่อเซลล์และสารเคมีที่ไม่ได้ใช้งาน
ระบบช่วงล่างและการหมุนเหวี่ยง
เนื้อเยื่อที่ถูกบดนั้นจะถูกวางไว้บนใบมีด CTAB และสอดเข้าไปในชามน้ำไหล จากนั้นนำมาผสมกับคลอโรฟอร์มแล้วปั่นแยกเพื่อแยกโปรตีนที่ละลายน้ำได้และวัสดุอื่น ๆ จากนั้น DNA จะตกตะกอนจากระยะที่เป็นน้ำและล้างอย่างระมัดระวังเพื่อกำจัดเกลือที่ปนเปื้อน ดีเอ็นเอที่บริสุทธิ์จะถูกถอนออกและเก็บไว้ในสไลด์ TE หรือน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว