วิธีการทำวุ้นสารอาหารในจานเลี้ยงเชื้อ

เนื้อหา

• คำสั่ง
• เคล็ดลับ
• สิ่งที่คุณต้องการ

น้ำซุปสารอาหารใช้สำหรับเพาะเชื้อแบคทีเรียเช่น Escherichia coli สูตรสำหรับน้ำซุปนี้แตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับชนิดของแบคทีเรียเช่นเดียวกับการปรากฏตัวของการดัดแปลงทางพันธุกรรมเช่นความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะ น้ำซุปสามารถแข็งตัวได้โดยการเติม agar-agar ซึ่งช่วยให้แบคทีเรียก่อตัวเป็นอาณานิคมที่แตกต่างกันในขณะที่ในวัฒนธรรมของเหลวพวกมันกระจายไปทั่วปริมาตร นี่เป็นเทคนิคพื้นฐาน แต่จำเป็นสำหรับวิธีการขั้นสูงเช่นการโคลนยีนหรือการตรวจทางจุลชีววิทยา บทความนี้สันนิษฐานว่าเชื้อ Escherichia coli ในห้องปฏิบัติการจะได้รับการเลี้ยงในจาน Luria broth agar (หรือจานเลี้ยงเชื้อ)

คำสั่ง

จาน Petri (ดาวพฤหัสบดีภาพ / Comstock รูปภาพ / Getty)

1. วัด tryptone จากแบคทีเรีย 10 กรัมสารสกัดจากยีสต์ 5 กรัมโซเดียมคลอไรด์ 5 กรัมโซเดียมหรือ agarose 15 กรัมและโซเดียมไฮดรอกไซด์ 1N 1 มิลลิลิตร ผสมกับน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อโดยอัตโนมัติจนกว่าจะได้ปริมาณ 1 ลิตร นึ่งสื่อในขวดหรือขวดที่มีฝาปิดมิดเป็นเวลา 25 นาที ปล่อยให้เย็นประมาณ 50 ° C ก่อนที่จะเพิ่มรีเอเจนต์ที่สามารถถูกทำลายโดยความร้อนสูงเช่นยาปฏิชีวนะหรืออาหารเสริมอื่น ๆ

2. ปล่อยให้อาหารที่นึ่งด้วยความร้อนเย็นถึง 50 ° C และไม่น้อยกว่า 45 ° C เนื่องจากวุ้นจะติดกับภาชนะก่อนที่จะถูกเท รับจานเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วเทให้เพียงพอเพื่อครอบคลุมพื้นที่ผิวทั้งหมดและอย่างน้อยก็ครึ่งความลึก หลีกเลี่ยงการบรรจุมากเกินไปและไม่ควรให้วุ้นถึงขอบด้านบนของแผ่น รอให้แข็งตัวในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อ (ตัวอย่างเช่นภายใต้ห้องไหลลามินาร์) ปล่อยให้ฝาปิดเปิดและมุมหนึ่งของฮูด

   
   

3. ทำให้แผ่นแห้ง แม้ว่าจะสามารถใช้งานได้ทันทีที่แข็ง แต่ความชื้นบางส่วนจะปรากฏบนพื้นผิวของวุ้นซึ่งจะป้องกันไม่ให้โคโลนีของแบคทีเรียติดแน่นเพียงพอ ดังนั้นจึงเป็นการดีกว่าที่จะทำให้แผ่นแห้งก่อนที่จะใช้แบคทีเรียใด ๆ เช่นโดยทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาสองสามวันหรือครึ่งชั่วโมงภายใต้ห้องไหลลามินาร์หรือในตู้อบ 37 ° C

4. เก็บจาน ควรวางแผ่นให้แห้งคว่ำ (กลับด้าน) และใส่กลับเข้าไปในบรรจุภัณฑ์เดิมปิดผนึกด้วยเทปและห่อด้วยกระดาษฟอยล์เพื่อป้องกันแสงหรือในภาชนะที่เหมาะสม เขียนวันเตรียมการเสมอและหลีกเลี่ยงการใช้งานถ้าแผ่นมีอายุมากกว่าสองเดือน

เคล็ดลับ

• ดำเนินการตามขั้นตอนหลายขั้นตอนก่อนหน้านี้ (โดยเฉพาะอย่างยิ่งทั้งหมด) ในสภาพแวดล้อมที่ปลอดเชื้อ (ตัวอย่างเช่นภายใต้เปลวไฟหรือแม่เบี้ยไหลแบบราบเรียบ) เพื่อป้องกันการปนเปื้อนในอากาศจากแบคทีเรียเข้าและเติบโตในสื่อ

สิ่งที่คุณต้องการ

• bacto-tryptone 10 กรัม
• สารสกัดจากยีสต์ 5 กรัม
• NaCl 5 กรัม
• 1 มิลลิลิตรของ 1N NaOH
• วุ้น 15 กรัมหรือ agarose
• อาหารเสริมเช่นยาปฏิชีวนะหรือกาแลคโตไซด์
• หม้อนึ่งความดัน
• ห้องปฏิบัติการเครื่องแก้ว
• จาน Petri
• การไหลแบบราบเรียบ
• Bunsen Nozzle
• Autoclave และวัสดุสิ้นเปลือง
• เครื่องชั่งและสินค้าอุปโภคบริโภค