วิธีทำเจล agarose

วิดีโอ: Making an Agarose Gel - University of Leicester

เนื้อหา

คำสั่ง
การเตรียมเจล agarose
การเตือน
สิ่งที่คุณต้องการ

Agarose gels ถูกสร้างขึ้นโดยนักวิทยาศาสตร์ที่ทำงานในห้องปฏิบัติการอณูชีววิทยาเพื่อศึกษาชิ้นส่วน DNA ที่ดัดแปลงระหว่างการทดลอง เทคนิคการทำเจลอะกาโรสเป็นทักษะพื้นฐานประจำวันที่ต้องมีความเชี่ยวชาญโดยนักวิจัยทุกคนเพราะจะช่วยให้สามารถมองเห็นดีเอ็นเอขนาดต่าง ๆ ได้โดยตรงสำหรับการตรวจสอบและการโคลนยีนโครงการ แม้ว่าการเตรียมเจลนั้นไม่ยากเช่นเดียวกับขั้นตอนการตรวจทางห้องปฏิบัติการทั้งหมด แต่ผู้เชี่ยวชาญควรได้รับการฝึกอบรมทางวิทยาศาสตร์เนื่องจากความเสี่ยงทางชีวภาพที่เกี่ยวข้อง

คำสั่ง

วิธีทำเจล agarose (รูปภาพ Comstock / รูปภาพ Comstock / Getty)

การเตรียมเจล agarose

ตรวจสอบให้แน่ใจว่าฐานเจลไม่มีรอยแตกหรือสิ่งใดที่อาจทำให้ agarose ร้อนรั่ว ทำความสะอาดถาดด้วยแอลกอฮอล์ 70% และทิ้งให้แห้งสนิท ฐานมีสองปลายเปิดและปลายปิดสอง ในบางรูปแบบคลิปเหล่านี้มีไว้เพื่อปิดปลาย แต่ส่วนใหญ่ต้องปิดผนึกด้วยการวางแถบเทประหว่างส่วนที่เปิด กดเทปอย่างแน่นหนาและแน่นหนาเนื่องจากอาจขยับออกจากที่วางและปล่อยให้ agarose ร้อนรั่ว
ขึ้นอยู่กับขนาดของชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่จะแยกและวิเคราะห์บน agarose gel กำหนดเปอร์เซ็นต์ที่เหมาะสมที่จำเป็น ตัวอย่างเช่นที่ 1% (w / v) agarose gel จะมีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์ 0.5 ถึง 10 kb DNA เซ็กเมนต์ เปอร์เซ็นต์ที่สูงขึ้น (agarose มากขึ้น) ชิ้นส่วนเล็ก ๆ ที่สามารถแยกออกได้ การทดลองประจำใช้ช่วงของ agarose 0.5% ถึง 2% สำหรับเจล agarose 1% ให้น้ำหนักผง agarose 1 กรัมในน้ำสลัดทางเคมีหรือระบบกักเก็บอื่น ๆ โอนอย่างระมัดระวังไปยังพื้นที่เตรียมห้องปฏิบัติการของเจล
ในพื้นที่เตรียมเจลที่เหมาะสมให้ทำการวัดอิเล็กโทรโฟเรซิสบัฟเฟอร์ 100 มล. มันควรจะอยู่ที่อุณหภูมิห้อง โอนผง agarose ไปที่ขวดทนไฟและเทปริมาตรที่วัดได้ของบัฟเฟอร์อิเลคโตรโฟรีซิส ค่อยๆอุ่นส่วนผสมในเตาไมโครเวฟ แต่อย่าต้มเพราะการระเหยสามารถเปลี่ยนเปอร์เซ็นต์ของอะกาโรสที่มีอยู่ได้ ตรวจสอบให้แน่ใจว่า agarose ทั้งหมดละลายเขย่าให้เข้ากันให้เย็นเล็กน้อยแล้วเพิ่ม 0.5 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตรของ ethidium โบรไมด์ อย่าหายใจเอาไอใด ๆ ออกไปเพราะอาจทำให้ปอดและเยื่อเมือกระคายเคือง นอกจากนี้อย่าให้ความร้อนแก่สารละลายหลังจากเติมเอทิเดียมโบรไมด์แล้ว เขย่าอีกครั้งเพื่อผสมและจากนั้นในขณะที่วิธีการแก้ปัญหายังคงร้อนพอที่จะรั่วไหลแจกจ่ายลงในฐานที่เตรียมไว้ โปรดทราบว่าหากมีตัวอย่างจำนวนมากหรือมีความเข้มข้นของ DNA อยู่เล็กน้อยอาจทำให้เกิดเจลหนาขึ้น อย่างไรก็ตามเจลที่ละเอียดกว่านั้นง่ายต่อการวิเคราะห์เพราะมันจะถูกถ่ายภาพให้ชัดเจนยิ่งขึ้น
ใส่หวีลงในเจลเพื่อสร้างร่องหรือหลุมสำหรับตัวอย่างที่จะวาง ทิ้งไว้ให้เย็นที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหลายชั่วโมงหรือในตู้เย็นสองสามนาที ในกรณีหลังเมื่อเจลพร้อมแล้วก็ควรสังเกตการปรากฏตัวของผลึกอะกาโรส โดยทั่วไปแล้วจะหายไปหากเจลได้รับอนุญาตให้อุ่นที่อุณหภูมิห้องบนเคาน์เตอร์สักสองสามนาทีก่อนการใช้งาน ลบหวีออกอย่างระมัดระวังเพื่อไม่ให้เจลฉีกขาดหรือแตกบ่อน้ำ agarose gel พร้อมใช้แล้ว หากไม่ได้ใช้งานทันทีจะต้องห่อในกระดาษแก้วหรือเก็บไว้ในภาชนะพลาสติกในตู้เย็นเพื่อป้องกันไม่ให้แห้งหรือละลาย

การเตือน

รีเอเจนต์ที่ใช้เป็นสารก่อมะเร็งที่เป็นไปได้และควรจัดการด้วยความระมัดระวังและการป้องกันที่เพียงพอ หากมีข้อผิดพลาดเกิดขึ้นระหว่างการเตรียมเจลไม่ควรอุ่นซ้ำ แต่จะถูกกำจัดออกและเจลใหม่จะถูกเตรียมอีกครั้ง